產品名稱：2×Fast Pfu Master Mix
中文名稱：2倍快速Pfu梅預混液

產品編號與包裝規格：

產品描述：本制品是將PCR反應所需的Fast Pfu梅、dNTPs、MgCl2、反應緩沖夜以及優化劑以及穩定劑，預先配制成2倍濃度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix專為擴增克龍DNA片段優化，高保真，錯誤率僅為1.3×10-6。使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應，非常方便。較普通Pfu梅，2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高靈敏度、抗干擾強等特點，能獲得更理想的擴增結果， 并大幅度縮短擴增反應時間，非常適用于1-20kb長片段的擴增。

產品特點：

高保真：具有同Pfu梅相同的保真度，為普通Taq酶的50倍。

靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出特定基因片段。

快速高效：Fast Pfu擴增速度為普通Pfu梅的數倍，72℃保溫30 秒可延伸1kb以上，可在較短時間內獲得高產量的PCR產物（圖例一）。

快捷：PCR反應所必需試劑全集于一管之中，數分鐘即可完成反應體系配制。

產品用途：用于要求保真度比較高，擴增長度較長的PCR反應，包括克龍PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成等。

使用建議：（Fast Pfu DNA聚合酶產生的PCR產物為平滑末端，無3′端"A" 突出，除使用環凱PCR一步定向克龍試劑盒（Cat. No: HKNR001） 外，其它PCR產物的克龍方案有：）

1)PCR前引物進行5′端加磷修飾或將PCR產物麟酸化處理后再直接克龍于平滑末端的載體中。

2)將產物3′末端加A后再與T載體連接。

3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設計引物時應適當增加引物的長度， 理想的引物長度為20-30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配制反應體系。

應用實例：圖例一）50μL 擴增體系中，λDNA 為模板， 擴增 1kb~20kb 片段。

泳道 M：λ/Hind III DNAMarker；

泳道 1：1kb；

泳道 2：2kb；

泳 道 3：4kb；

泳 道 4：6kb；

泳道 5：8kb；

泳道 6：10kb；

泳道 7：12kb；

泳道 8：20kb。

保存溫度：-20℃。

產品包裝（A 包裝）：

質量保證：經檢測無外源核酸酶殘留；qPCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留；能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

常用反應體系（50μL）：

常用PCR 循環：

注意事項：

1)需溶解*后使用，防止離子濃度不均勻。

2)對高GC含量模板，建議將變性溫度提高到98℃。

3)對于高GC模板，建議配套使用PCR萬能增強劑 I（Cat.No: HKE055）或者添加終濃度為5%-8% DMSO。